德国慕尼黑工业大学医学院病毒学研究所和德国感染研究中心 (DZIF) 合作完成的一项临床前研究证明，使用小干扰RNA（siRNA）在肝脏中沉默PD-L1可提高慢乙肝接种治疗性疫苗的功效，并将临床前研究结论发表在Biomolecules上。

来自Biomolecules，图 1. PD-L1 检查点阻断对HBV特异性T细胞功能的影响

乙肝在研新药TherVacB，以siRNA沉默PD-L1，临床前可增强有效性

在慢性乙肝病毒（HBV）感染中，病毒特异性T细胞稀少且部分功能失调。研究人员认为，当前开发并接种治疗性疫苗是一种很有前景的策略，可以诱导和激活新的病毒特异性T细胞。然而，在慢性HBV携带者或高抗原水平患者中发现，治疗性疫苗接种本身可能还不足以治愈HBV。

原因之一是，免疫检查点对抗病毒T细胞的损害。在本研究中，使用了 siRNA和异源初免增强治疗性乙肝疫苗接种方案（TherVacB）来干扰主要免疫检查点、程序性死亡蛋白-1（PD-1）及其相互作用配体（PD-L1）。

来自Biomolecules，图 2. siPD-L1 和 TherVacB 组合的抗病毒功效

临床前结果表明，在感染含有HBV基因组的腺相关病毒后持续复制HBV的小鼠中，靶向PD-L1的siRNA在治疗性疫苗接种后导致HBV特异性CD8+T细胞的功能更高，并允许在外周血与肝脏中更持久的抗病毒作用和控制HBV效果。

如果PD-L1在初免期间比在加强接种期间下调，则抗病毒作用更显著。因此，使用siRNA靶向PD-L1是提高治疗性乙肝疫苗接种效力并最终治愈HBV的一种有前途方法。

在本临床前研究中，数据说明siRNA介导的PD-L1阻断可以提高治疗性乙肝疫苗的功效，甚至可能优于针对PD-L1的抗体在激活肝脏局部T细胞方面的效果。

Biomolecules，图 3. TherVacB 和 siPD-L1 对 HBV 在肝脏中持久性的影响

证明了治疗性乙肝疫苗接种与RNAi介导的检查点抑制相结合的策略，可以改善HBV特异性T细胞免疫应答，有效减少了血液中的病毒抗原水平，并能够控制HBV在肝脏中的复制和清除肝脏中的HBV阳性肝细胞。T细胞启动过程中的检查点抑制，被证明比 MVA载体加强疫苗的扩增过程更有效。尽管这种方法仍存在肝毒性风险，但siRNA介导的PD-L1敲除本身并未显示出任何有益效果。

由于治疗性乙肝疫苗接种与siRNA下调PD-L1的组合疗法，可以增强T细胞的细胞毒性，因此，研究人员认为还需要仔细监测上述组合疗法的潜在肝毒性。

尽管以往在开发治疗性乙肝疫苗方向，科研人员已经付出巨大努力，但很少看到能通过治疗性疫苗接种来恢复HBV特异性免疫应答。一方面，可能是由于疫苗设计欠佳。另一方面，治疗性疫苗在慢乙肝受试者的临床试验部分数据与免疫治疗相关的不良反应相关。

此前已对一款在研治疗性乙肝疫苗TherVacB进行了动物实验，结果表明，TherVacB可以降低小鼠的乙肝表面抗原水平，且诱导的T细胞的效应功能与其表面的PD-L1表达密切相关。基于以往这些发现，本研究继续调查了PD-L1抑制效果。尽管在治疗性乙肝疫苗接种中再施以抑制PD-1/PD-L1通路的药物设计方案并不新鲜，但通常通过使用针对PD-1的抗体来实现。

本研究亮点是，证明了使用siRNA来敲低关键的免疫检查点分子，从而改变目标器官肝脏的微环境，是实现器官特异性检查点抑制的可行方法。在本研究中，使用了一种转染试剂，它允许肝细胞特异性靶向siRNA，这证明足以限制肝脏中的免疫抑制。随着siRNA和其他非编码RNA疗法的最新进展以及位点特异性转染和递送试剂开发，预计未来将出现新机会和更复杂的靶向疗法。

来自Biomolecules，图 4. 初免期间肝脏中的 PD-L1 敲低增强了治疗性疫苗接种的效果，但在加强疫苗接种期间没有

本临床前研究中，尽管接受针对PD-L1的siRNA的小鼠的 ALT略有升高，但siRNA治疗表现出良好的耐受性，并当与TherVacB联用时，可高效增强T细胞功能和抗病毒功效，从而控制HBV复制，甚至实现肝脏清除。ALT升高可能由于 siPD-L1毒性或由于肝脏中潜在的自身攻击性T细胞的激活，或治疗性疫苗接种后HBV特异性T细胞的细胞毒性增加。

正如研究人员曾经观察到，在应用siPD-L1而不同时进行治疗性免疫接种时，ALT会出现短暂升高，研究人员假设 siPDL-1治疗本身可能会引起与抗体介导的检查点抑制类似的副作用。在治疗性疫苗接种后，HBV特异性T细胞效应功能可能进一步增强。在将来，进一步的研究将需要确定抗体或RNAi的检查点抑制是否具有更理想的耐受性。

检查点抑制效果的时间点依赖性差异需要进一步表征疫苗诱导的T细胞反应中的 PD-1/PD-L1 通路。早期的研究强调，当阻断免疫检查点时，时间和背景可能会影响效应反应的结果。与他们的发现相反，本研究观察到在 MVA增强T细胞免疫应答期间应用检查点抑制没有任何作用。然而，总的来说，这证明了在预防自身免疫和增强病原体特异性免疫反应之间的微妙平衡。

当将这些发现转化为临床时，需要密切监测副作用和潜在肝毒性，并且必须采取谨慎的方法来找到不会扰乱免疫系统稳态的有效剂量。

来自Biomolecules，可见慕尼黑工业大学医学院病毒学研究所发表通过siRNA沉默PD-L1来增强治疗性乙肝疫苗疗效

小番健康结语：假如您只是普通读者，可以忽略本临床前研究的细枝末节，研究旨在说明在一项临床前动物实验中，以强效调降乙肝表面抗原水平的小干扰RNA（以往RNAi相关候选药物临床开发中，已经证明在降低病毒抗原方面的潜力）来靶向PD-L1，可以提高治疗性乙肝疫苗(TherVacB) 的疗效。

由于在以往治疗性乙肝疫苗开发工作中，这种新型免疫疗法也会遇到一些问题，本研究重在解决这些问题，方法即使用siRNA在肝脏中沉默PD-L1可以提高治疗性乙肝疫苗的疗效，当然研究人员也注意到了这种组合方法有一定的肝毒性风险，需要密切观察后续开发进展。

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